膠原酶的使用

膠原酶的分類:
膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞專用膠原酶,要根據所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
1、膠原酶Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和腎上腺組織細胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個細胞,用于哺乳動細胞的分離。
2、膠原酶Ⅱ適用于肝臟,骨,甲狀腺,心臟和唾液腺組織。
3、膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。
4、膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離,將結締組織分離成單個細胞。

膠原酶的使用:
將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊。
將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。
將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內,每隔3min振搖一次,如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時間與組織的類別很有關系,對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織,消化時間4~48h, 對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min,也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經搖動即成細胞團或單個細胞,可以認為已消化充分。上皮組織經膠原酶消化后,由于上皮細胞對此酶有耐受性,可能仍有一些細胞團未完全分散,但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生 長,因此,如無特殊需要可以不必再進一步處理。
收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養液制成細胞懸液,接種培養瓶。

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