鈣黃綠素染色步驟說明


鈣黃綠素染色步驟說明:
 
鈣黃綠素(Calcein)用于絡合指示劑熒光指示劑等領域。其鈉鹽為橙紅色結晶,溶于水,呈黃色而有綠色熒光,不溶于無水乙醇和乙醚。以下為鈣黃綠素染色步驟,僅供參考。
 
鈣黃綠素染色步驟:
1、用DMSO制備1 mM 的鈣黃綠素溶液,并用PBS將其稀釋制成1~50 μM的鈣黃綠素溶液。
2、將1/10細胞培養基體積的鈣黃綠素溶液加入到細胞培養基中。
3、在37℃培養細胞15-30分鐘。
4、用PBS或適當的緩沖液洗滌細胞兩次。
5、用490 nm激發波長,515 nm發射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。
a、如果鈣黃綠素溶液很難進入細胞,可以使用表面活性劑,如Pluronic F127。
b、或者您也可以用1/10濃度的Calcein-AM溶液代替培養基。
 
用途:絡合指示劑。熒光指示劑。測定鈣、鍶、鋇、銅和錳。鈣黃綠素,Calcein另外在核酸擴增過程中會形成大量的焦磷酸根離子。熒光染料中的錳離子與鈣黃綠素結合導致熒光淬滅,同時染料顏色為橙色。當擴增反應形成焦磷酸根離子時,錳離子與焦磷酸根離子結合形成焦磷酸錳,引起熒光信號的產生,同時染料顏色變為黃綠色。鈣黃綠素目前已廣泛應用于恒溫擴增反應的熒光檢測。
 
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