匯百試劑:有關TTC染色原理的介紹


TTC染色是TTC和活細胞線粒體內的琥珀酸脫氫酶反應,生成紅色的甲月贊,用來表示細胞的活力。配制多為2%,染色要避光,37度條件下,它是評價腦缺血損傷常用的指標。
 
TTC染色原理(http://www.clomho.icu):
TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復合物,1894年首次合成用來檢測種子的生存能力,1958年開始用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統的質子受體,與正常組織中的脫氫酶反應而呈紅色,而缺血組織內脫氫酶活性下降,不能反應,故不會產生變化呈蒼白。
 
ttc可以被活細胞中的具有還原活性的酶(好像主要是琥珀酸脫氫酶)還原生成粉紅色的還原產物,所以活組織部分呈現粉紅色,而死亡的細胞的還原酶的活力已經消失,因此ttc不能被還原,所以死亡的組織呈現白色。
 
對于種子或者植物組織來說,染色結果為活組織被染成不同程度的紅色,死組織或者無生命力的組織不著色。對于缺血梗塞組織,因組織壞死脫氫酶活力喪失呈現蒼白色,而正常組織呈深紅色。TTC常用的染色濃度為2%(w/v),也可根據組織類型做濃度的適當調整。
 
TTC染色步驟(http://www.clomho.icu):
1、取腦:可麻醉后直接取腦或經生理鹽水灌注后取腦。因為腦組織未用多聚甲醛固定,所以較軟,取腦時更應仔細,保持大腦的完整性。
2、-20度冰箱中速凍20分鐘左右,便于切片。
3、切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計算面積的話,應切得均勻或用專門的腦槽。
4、將切片置于TTC中,常規濃度為2%,也有用1%或更低濃度的。
5、用錫箔紙蓋住后,放入37C溫箱15~30min,不時翻動腦片,使均勻接觸到染色液。
6、染色后效果:為皮層下梗死。
TTC染液是一種脂溶性光敏感復合物,即可用來檢測種子的生存能力,也可用來檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。檢測機制在于TTC本身可作為一種氧化還原指示劑,活細胞內的脫氫酶(尤其是線粒體內的琥珀酸脫氫酶)可以將TTC還原為紅色甲臢化合物TPF(1,3,5-triphenylformazan)。
 
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